Systematic Study on Generation of Mammalian Production Cell Lines by Targeted Integration (RMCE)

Qiao, Junhua

Site-spezifische Rekombinasen haben die systematische Generierung von transgenen Zelllinien, embryonalen Stammzellen (ES-) / Tieren revolutioniert. Diese werden letztendlich auch ihr Potenzial in der genetischen Modifikation von induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS) zeigen. Unsere im Jahr 1994 eingeführte FLP-Rekombinase vermittelte Kassetten Austausch (FLP-RMCE) System erlaubt den Austausch von einer Ziel-Kassette durch eine Kassette mit dem interessierenden Gen (GOI), das als Teil eines Austauschvektors eingeführt wurde. Der Prozess ist "sauber" in dem Sinne, dass er weder prokaryontische Vektorteile parallel einführt noch einen Selektionsmarker hinterlässt. Strenge Auswahlprinzipien liefern Master-Zell-Linien, die nachfolgende RMCE Zyklen ohne Arzneimittelselektion und mit einer erheblichen Effizienz (~ 10%) ermöglichen. Das Beispiel von Chinesischen Hamster Ovarialzellen (CHO) zeigt, dass die Strategie sogar für Zell-Linien mit einer instabilen Genotyp erfolgreich ist.

Site-specific recombinases have revolutionized the systematic generation of transgenic cell lines, embryonic stem (ES-) cells/animals, and will ultimately also reveal their potential in the genetic modification of induced pluripotent stem (iPS-) cells. Introduced in 1994, our Flp-recombinase mediated cassette exchange (Flp-RMCE) strategy permits the exchange of a target cassette for a cassette with the gene-of-interest (GOI), introduced as a part of an exchange vector. The process is "clean” in the sense that it does not co-introduce prokaryotic vector parts nor does it leave behind a selection marker. Stringent selection principles provide master cell lines permitting subsequent RMCE cycles in the absence of a drug selection and with a considerable efficiency (~10%). Exemplified by Chinese hamster ovary (CHO) cells, the strategy proves to be successful even for cell lines with an unstable genotype.

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Qiao, Junhua: Systematic Study on Generation of Mammalian Production Cell Lines by Targeted Integration (RMCE). 2009.

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